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TE缓冲液配制全攻略(100mL):称取0.121g Tris碱(或取1mL 1M Tris-HCl储备液)+ 0.2mL 0.5M EDTA(pH8.0),定容至100mL,调pH至8.0,高压灭菌或过滤除菌。关键提醒:EDTA在pH<8.0时难以溶解,溶液浑浊时调高pH即可变澄清;用于RNA保存必须用DEPC处理水配制···
10M醋酸铵配制全攻略(100mL):称取77.1g醋酸铵溶于30mL去离子水,定容至100mL,0.22μm滤器过滤除菌,密封室温保存。核心用途:RNA乙醇沉淀辅助试剂。关键提醒:醋酸铵受热易分解,不可高温高压灭菌,必须采用过滤除菌。实验室高浓度盐溶液配制必读。
3M醋酸钠配制全攻略(100mL):称取40.8g NaOAc·3H2O溶于40mL去离子水,用冰醋酸调pH至5.2,定容至100mL,高压灭菌后室温保存。关键提醒:低温出现沉淀属正常现象,37℃水浴复溶即可恢复澄清。DNA乙醇沉淀辅助试剂配制必读
0.5M EDTA配制全攻略(1L):称取186.1g Na2EDTA·2H2O溶于800mL去离子水,用NaOH调节pH至8.0(约需20g)使EDTA完全溶解,定容至1L,分装后高压灭菌,室温保存。核心原理:EDTA在pH<7.0时几乎不溶,只有pH达到8.0才能完全解离溶解。如4℃出现结晶,37℃水浴复···
2.5N HCl配制全攻略(100mL):取78.4mL去离子水,缓慢加入21.6mL浓盐酸(11.6N),边加边搅拌,混匀后室温保存。关键提醒:浓盐酸具强腐蚀性和挥发性,必须在通风橱中操作,严格遵守“酸入水”规则,佩戴防护眼镜和防腐蚀手套。实验室基础试剂配制必读。
苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)配制全攻略:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀,棕色玻璃瓶4℃保存。氯仿使蛋白变性并促进分相,异戊醇消除气泡。关键提醒:溶液有剧毒,严禁在通风橱外操作,皮肤接触用大量水冲洗,忌用乙醇。核酸提取蛋白···
Tris-HCl平衡苯酚配制全攻略:-20℃结晶苯酚68℃融解,加0.1%羟基喹啉,依次用1M和0.1M Tris-HCl(pH8.0)平衡,磁力搅拌15分钟×2次,弃水相,最终有机相pH≥7.8。棕色瓶4℃避光保存。关键提醒:苯酚腐蚀性极强,必须在通风橱中操作,戴手套和防护镜。核酸提···
10%(W/V)SDS溶液配制全攻略(100mL):称取10g高纯度SDS,68℃水浴加热溶解于80mL去离子水中,滴加浓盐酸调pH至7.2,定容至100mL,室温保存。关键提醒:SDS对呼吸道和皮肤有强烈刺激性,称量时务必佩戴口罩、护目镜和手套,并在通风橱中操作。实验室基础试剂···
2N NaOH配制全攻略(100mL):称取8g NaOH,缓慢加入80mL去离子水中(边加边搅拌),完全溶解并冷却至室温后定容至100mL,转移至塑料容器中室温保存。关键提醒:必须使用塑料烧杯(玻璃有炸裂风险),定容前务必冷却至室温(高温体积膨胀会导致浓度偏差)。实···
Solution III中和液配方全解析:3M乙酸钾(KOAc)+ 5M冰醋酸(CH₃COOH)配制方案(500mL),配制步骤及关键操作提醒——使用前4℃预冷促进蛋白-SDS复合物(PDS)完全沉淀;加入后温和颠倒混匀6-8次,中和不均匀会导致质粒DNA被包裹损失。质粒提取中和步骤核心···