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提供1L PBS磷酸盐缓冲液完整配制方案:8g NaCl、0.2g KCl、1.42g Na2HPO4、0.27g KH2PO4,调pH7.4后高压灭菌。适用于细胞培养、免疫组化、Western blot等实验的洗涤和稀释,可根据需要补充CaCl2和MgCl2。
提供1L 0.5M磷酸盐缓冲液(pH 7.2)完整配制方案:134g Na2HPO4·7H2O,85%浓磷酸调至pH7.2,高压灭菌后室温保存。磷酸盐有多种水合物形式,称量前须确认试剂瓶标签,建议在实验温度下校准pH值。
提供1L 10×TBST浓缩洗涤缓冲液完整配制方案:121g Tris碱、55g硼酸、87.66g NaCl、10ml Tween-20,调pH7.5-8.0后高压灭菌。适用于Western blot和ELISA中膜洗涤,有效降低背景信号,使用时10倍稀释,室温可稳定保存3个月。
提供1L 10×PBST浓缩洗涤缓冲液完整配制方案:80g NaCl、2g KCl、14.4g Na2HPO4(或29g十二水合物)、2.4g KH2PO4、10ml Tween-20,调pH7.4后高压灭菌。含Tween-20有效降低非特异性结合,是Western blot和ELISA的核心洗涤液,使用时10倍稀释。
提供1L考马斯亮蓝染色脱色液完整配制方案:100ml冰醋酸、50ml乙醇、850ml去离子水。适用于SDS-PAGE凝胶考马斯亮蓝染色后的背景脱色,需多次更换脱色液直至背景清晰。含醋酸和乙醇,须按有机废液标准处理。
提供1L考马斯亮蓝R-250蛋白染色液完整配制方案:1g R-250、250ml异丙醇、100ml冰醋酸,定容后滤纸过滤。适用于SDS-PAGE凝胶中蛋白条带的灵敏检测。含异丙醇和冰醋酸,须按有机废液标准处理,严禁直接下水道排放
提供1L 5×Tris-Glycine SDS-PAGE电泳缓冲液完整配制方案:15.1g Tris、94g Glycine、5.0g SDS,定容后室温保存,是蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳的核心运行缓冲液。含SDS废液需按有机溶剂标准处理。
提供20ml 10mM ATP(三磷酸腺苷)溶液完整配制方案:121mg Na2ATP·3H2O溶于25mM Tris-HCl(pH8.0),小份分装后-20℃避光保存。ATP对光敏感,须用棕色管或铝箔包裹,是激酶反应等分子生物学实验的关键能量底物。
提供20ml 1M DTT还原剂完整配制方案:3.09g DTT溶于0.01M NaOAc(pH5.2),0.22μm过滤除菌后小份分装-20℃保存。DTT易被氧化,须一次性使用,避免反复冻融,是蛋白电泳还原型上样缓冲液的关键添加剂。
提供5ml 5×SDS-PAGE Loading Buffer完整配制方案:250mM Tris-HCl pH6.8、10% SDS、0.5% BPB、50%甘油,使用前每小份加入5% β-巯基乙醇。含溴酚蓝指示剂追踪电泳前沿,是蛋白电泳上样核心试剂。β-巯基乙醇具恶臭剧毒,须通风橱内操作。