蛋白酶K（Proteinase K）

蛋白酶K（Proteinase K）——高活性广谱丝氨酸蛋白酶，科研实验的理想之选

产品概述

蛋白酶K（Proteinase K）是一种来源于林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber） 的枯草蛋白酶类高活性丝氨酸蛋白酶。作为一种非特异性蛋白内切酶，蛋白酶K能够高效切割脂肪族氨基酸、疏水性氨基酸和芳香族氨基酸羧基端连接的肽键和酯键，具有极其广泛的底物特异性。其分子量约为28.9 kDa（单体），由约277个氨基酸残基组成。

凭借广谱高效的蛋白降解能力、优异的稳定性以及对多种变性剂的耐受性，蛋白酶K已成为分子生物学、细胞生物学及生物制药等领域中不可或缺的核心工具酶。在分子生物学研究领域，蛋白酶K凭借卓越的蛋白降解性能，始终是核酸提取与样本裂解等核心实验步骤的关键工具。

核心优势

一、广谱高效，蛋白水解能力出众

蛋白酶K是一种非特异性蛋白内切酶，能够高效降解多种天然和变性蛋白质。其无明显的切割特异性，可在脂肪族、芳香族或疏水性氨基酸的羧基侧裂解肽键。该酶能够切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，对天然蛋白质的酶切降解极为有效。在核酸提取过程中，蛋白酶K能够快速消化细胞裂解释放的组蛋白、核酸结合蛋白及其他杂质蛋白，同时有效灭活内源性RNase和DNase，保护核酸免受降解。

二、耐受性强，在变性剂中活性更优

蛋白酶K最显著的特点之一是对多种化学变性剂具有优异的耐受性。该酶在SDS（1%）、尿素或EDTA存在时仍保持高活性。研究表明，尿素和十二烷基硫酸钠（SDS）可以浓度依赖的方式强烈（超过7倍）刺激蛋白酶K的活性。在0.2-1% SDS或约10mM尿素存在的情况下，蛋白酶K显示更高的酶活性。这一特性使其特别适合与SDS、EDTA等常用细胞裂解液成分联合使用，在核酸提取过程中可同步完成细胞裂解与蛋白消化，大幅简化实验流程。

三、宽pH与温度范围，实验条件灵活

蛋白酶K在极宽的pH范围（pH 4.0-12.5） 内保持稳定和活性，最佳pH范围为pH 7.5-8.0。其最佳反应温度为65℃，但在65℃或更高的温度下蛋白酶K自身也会迅速降解，因此推荐反应温度选择50-55℃。蛋白酶K在25℃至65℃的使用温度范围内均可保持稳定。95℃加热10分钟即可使蛋白酶K完全失活，便于实验后的终止处理。宽泛的活性条件赋予了实验设计极大的灵活性，可根据不同样本类型优化反应温度和时间。

四、高纯度、无核酸酶污染

本产品经过色谱纯化等多步精制工艺处理，不含DNase、不含RNase，可直接用于消化各种蛋白。经严格质检，无DNA污染。这一高纯度标准确保在去除杂质蛋白的同时，不会引入核酸酶污染，保障核酸模板的完整性和下游实验的可靠性。该酶比活性≥30 U/mg蛋白，批次间表现均一，可提供可重复的实验结果。

五、多剂型可选，适配不同实验场景

本产品提供多种剂型与规格，灵活适配各类实验需求：

• 冻干粉形式：白色或类白色粉末，便于长期保存和精确称量

• 溶液形式：20 mg/mL无菌溶液，即开即用

• 分子生物学级：经过严格质控，专用于核酸提取等对纯度要求极高的实验

六、重组表达技术，批次一致性更优

本产品通过基因重组技术在酵母菌株中高效表达纯化而成。相比传统天然菌株提取工艺，重组酶比天然酶的纯度更高，具有批间差更小、产能更大、供应更有保障的优势。

核心技术参数

核心应用场景

一、核酸提取与纯化（核心应用）

蛋白酶K是基因组DNA和总RNA提取流程中不可或缺的关键试剂。其核心作用包括：

• 高效裂解细胞：高效降解细胞和组织中的结构蛋白，释放胞内核酸

• 灭活核酸酶：快速消化内源性RNase和DNase，保护核酸免受降解

• 解离核蛋白复合物：去除与DNA/RNA结合的组蛋白及其他蛋白，提升核酸纯度和得率

在DNA提取过程中，蛋白酶K能够高效地降解细胞和组织中的蛋白质，包括那些与DNA紧密结合的组蛋白，从而释放出纯净的DNA，为后续的PCR扩增、测序等实验提供高质量的DNA模板。在RNA提取中，用于灭活RNase，保护RNA的完整性。特别在新冠病毒核酸检测中，蛋白酶K是病毒核酸释放的关键试剂。

二、组织消化与细胞裂解

在动物组织、植物组织及微生物样本的前处理中，蛋白酶K可高效消化结缔组织、细胞壁及细胞膜结构，释放细胞内含物。特别适用于小鼠基因型鉴定（鼠尾裂解） 、石蜡包埋组织切片脱蛋白处理等实验场景。在0.1-0.5% SDS存在的情况下，蛋白酶K可保持活性，在不损害分离DNA完整性的前提下，可以消化DNA制剂中的多种蛋白质和核酸酶。

三、蛋白质研究

• 蛋白质一般降解：用于生物样品中蛋白质的广泛消化

• 蛋白质印迹（Western Blot） ：用于样本前处理中的蛋白消化

• 去除核酸制备中的核酸酶：去除DNA和RNA制备过程中的核酸酶

四、染色体DNA制备与脉冲场电泳

蛋白酶K可用于制备脉冲场电泳（PFGE）所需的染色体DNA。使用蛋白酶K制备的染色体DNA完美适用于脉冲场电泳、用于蛋白质指纹图谱分析的染色体DNA以及去除DNA和RNA制备过程中的核酸酶。

五、法医学与病原检测

蛋白酶K可用于处理RNase-Free的水，可替代DEPC处理RNA抽提用的离心管和枪头，实现灭活RNase A的目的。在法医学中，蛋白酶K用于降解检材中的干扰蛋白，提高DNA指纹分析的准确性。

六、生物制药与工业化生产

本产品广泛应用于分子生物学、分子诊断学及生物制药业等领域中去除蛋白质以及蛋白质水解制备多肽和氨基酸方面，适合工业化生产条件下的应用需求。

品质保障

• 经过色谱纯化等多步精制工艺，比活性≥30 U/mg蛋白

• 严格质控：不含DNase、不含RNase、无DNA污染

• 批次间性能高度一致，提供可重复的实验结果

• 重组表达工艺，批间差更小、供应更有保障

• 适用于分子生物学、细胞生物学及生物化学研究

使用与储存建议

一、推荐反应条件

• 反应体系：根据样本类型，推荐工作浓度0.05-1 mg/mL

• 反应条件：50-55℃孵育15-60分钟（组织样本建议延长至过夜）

• 失活处理：95℃加热10分钟使蛋白酶K完全失活

二、注意事项

• 蛋白酶K在SDS（1%）、EDTA、尿素等变性剂存在下仍保持高活性，可与裂解液联合使用

• Ca²⁺可增强蛋白酶K的热稳定性，在反应体系中可考虑添加

• 处理RNA样品时，务必使用不含RNase的蛋白酶K

• 冻干粉使用前需用无菌水或合适缓冲液溶解

三、储存条件

• 冻干粉：2-8℃保存

• 溶液形式：-20℃保存

• 有效期：详见产品标签

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